Coronavirusul sindromului de diaree acută porcină (SADS-CoV) este un coronavirus patogen enteric porcin nou descoperit, care poate provoca diaree apoasă la purceii nou-născuți și poate provoca pierderi economice semnificative pentru industria porcilor.În prezent, nu există o metodă serologică adecvată pentru a evalua eficacitatea infecției cu SADS-CoV și a vaccinului, așa că este nevoie urgentă de a utiliza un test imunosorbent enzimatic (ELISA) eficient pentru a compensa această deficiență.Aici, o plasmidă recombinantă care exprimă proteina SADS-CoV spike (S) fuzionată cu domeniul IgG uman Fc a fost construită pentru a produce baculovirus recombinant și exprimată în celule HEK 293F.Proteina S-Fc este purificată cu rășină de proteină G și păstrează reactivitatea cu anticorpii anti-Fc uman și anti-SADS-CoV.Apoi proteina S-Fc a fost utilizată pentru a dezvolta ELISA indirect (S-iELISA) și a optimiza condițiile de reacție ale S-iELISA.Ca rezultat, prin analiza valorii OD450nm a 40 de seruri negative SADS-CoV confirmate prin test de imunofluorescență (IFA) și Western blot, valoarea limită a fost determinată a fi 0,3711.Coeficientul de variație (CV) al celor 6 seruri pozitive SADS-CoV în cadrul și între ciclurile de S-iELISA au fost toate mai mici de 10%.Testul de reactivitate încrucișată a arătat că S-iELISA nu are reactivitate încrucișată cu alte seruri virale porcine.În plus, pe baza detectării a 111 probe clinice de ser, rata globală de coincidență a IFA și S-iELISA a fost de 97,3%.Testul de neutralizare a virusului cu 7 valori OD450nm diferite ale serului a arătat că valoarea OD450nm detectată prin S-iELISA a fost corelată pozitiv cu testul de neutralizare a virusului.În cele din urmă, S-iELISA a fost efectuat pe 300 de probe de ser de fermă de porci.Trusele comerciale ale altor enterovirusuri porcine au arătat că ratele IgG pozitive ale SADS-CoV, TGEV, PDCoV și PEDV au fost de 81,7%, 54% și, respectiv, 65,3%., respectiv 6%.Rezultatele arată că S-iELISA este specific, sensibil și reproductibil și poate fi utilizat pentru a detecta infecția SADS-CoV în industria porcilor.Acest articol este protejat de drepturi de autor.toate drepturile rezervate.
Ora postării: 22-jun-2021